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今天跟大家一起學(xué)習的是冰凍切片制片的影響因素，本文由普拉特澤生物根據(jù)承接的多例動植物冰凍切片代做實驗總結(jié)分享。冰凍切片因其方便、快捷的特性，除了實驗室內(nèi)常用來觀察樣本外，在臨床手術(shù)中的應(yīng)用非常廣泛。冰凍切片可以在手術(shù)過程中觀察腫瘤的性質(zhì)，對下一步手術(shù)步驟起決定性作用，所以冰凍切片的結(jié)果準確性要求較高，本文旨在為大家規(guī)避各種影響冰凍切片結(jié)果的各種因素，最大限度的提高實驗的準確性，給到前端正確可信的判斷。

前幾篇我們學(xué)習了冰凍切片的實驗介紹、實驗步驟、注意事項，大家可以獨立的完成冰凍切片的操作了嗎？記得溫故而知新，隨時回去復(fù)習哦~

冰凍切片……………………………………實驗介紹

冰凍切片……………………………………操作步驟

冰凍切片實操………………………………注意事項

好了話不多說上干貨，我們從組織取材、冷凍時間與溫度、切片染色、冰晶形成、切片皺縮或卷縮、組織塊脫落對冰凍切片結(jié)果的影響及原因，希望大家盡量避免以及注意對結(jié)果的分析：

1、組織取材對制片的影響

組織取材大小：組織塊大小要適宜，冷凍切片機內(nèi)切片刀移動的范圍有一定的限制，超出其范圍時，易致切片不全，一般情況下，冰凍切片的組織大小為1.5*1.5 cm厚2 mm。（卵巢及脂肪組織可稍微大些）組織塊過大，切片時阻力過大，易產(chǎn)生皺折、刀痕，組織易崩碎，增加制片難度，影響觀察診斷。

組織內(nèi)含過多的脂肪或壞死組織：脂肪或壞死組織較一般的組織冷凍的溫度要低些，當活組織達到所需的溫度時，脂肪或壞死組織還比較軟，從而影響切片的完整性和檢測發(fā)出的時間。

組織塊過冷：組織冷凍過度易致切片破碎或呈粉沫狀，不能制作一張完整的切片。

組織塊冷凍不均勻：組織塊放入液氮時不能保持水平狀態(tài)且液氨量不足的情況下，可產(chǎn)生此現(xiàn)象。

2、冷凍時間、溫度對制片的影響

根據(jù)組織塊的大小性質(zhì)確定冷凍時間一般13~17 s(使用液氮者)，若組織較大或脂肪組織時間可適當長些，而甲狀腺、腦組織和淋巴組織等冷凍的時間相對要短些。（參考上文各組織冰凍切片的適宜溫度）
3、染色對制片的影響

尤以細胞核的染色最為關(guān)鍵，在寒冷的冬季，室溫過低時，影響核的著色，可適當加溫，用以增色；蘇木毒的酸堿應(yīng)適宜，經(jīng)常觀察其染液的n值，過堿時應(yīng)及時更換，鹽酸酒精分化活度，時間控制到位，否則易造成核著色不佳，染色質(zhì)不清晰，影響診斷的準確性。

4、冰晶的形成對制片的影響

常見原因：取決于組織含水量的大小，尤以組織細胞水腫，淋巴結(jié)，縱隔腫瘤，卵巢腫瘤為甚，送檢取材過程中接觸水源，同是造成冰晶形成的原因。

解決方法：使用液氮時間上控制到位，保證一次凍透標本1.組織送檢取材時，盡量避開水源2.如遇含水量高的標本時，應(yīng)盡量用干紗布吸干水分后再行冷凍。

5、切片皺縮或卷縮對制片的影響

常見的原因：①刀鋒變鈍。②防卷板粘有異物，防卷板的作用是防止切片卷縮，但若粘有異物，切片時組織會被擠壓而縮在一起。③防卷板與刀鋒的位置不平行、不協(xié)調(diào)。④組織塊包埋不完全，缺乏支撐作用。

解決方法:①注意檢查刀具，及時更換刀口，定期磨刀。②保持防卷板的清潔，每做一例冷凍切片，均應(yīng)將刀口及防卷板拭擦干凈，防止切片的污染和切片皺縮。③調(diào)整刀、防卷板的位置，保證兩者平行，且防卷板次刀鋒前0.2 mm左右。包埋組織應(yīng)完全，沒法切片者再滴加包埋膠。

6、組織塊脫落對切片的影響。

冷凍切片一般要求在30min內(nèi)發(fā)出病理報告，以便手術(shù)醫(yī)生能盡快選擇手術(shù)方式。

常見原因:①組織內(nèi)含過多的壞死組織。組織細胞壞死崩解后，局部的滲透壓升高，吸收水分，切片一經(jīng)固定，水分逸出，壞死組織失去支撐作用，染色時組織容易脫落，②因際液濃度過低。③載坡片不干凈。④切片太厚。

處理方法:①避免組織內(nèi)帶有壞死組織。②定期更換固定液。股每周更換一次，例數(shù)較多者，適當增加次數(shù)。③保持載玻片干凈，平時應(yīng)將玻片蓋好，防止就發(fā)申或其它異物的污染。④調(diào)好切片的厚度，切片厚度以5~7μm為宜。

對于冰凍切片結(jié)果影響的因素我們就全部說完啦，希望大家在冰凍切片制片時都能直面、規(guī)避這些影響，需要代做冰凍切片、或有更多實驗問題的歡迎留言探討哦。

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