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動物組織番紅固綠染色實驗步驟由普拉特澤生物病理實驗平臺為大家總結(jié)分享。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩(wěn)定的番紅固綠染色外包實驗服務，本文給大家分享咱們技術(shù)長期總結(jié)下來的動物組織番紅固綠組織染色實驗步驟：

一、番紅固綠染色原理與實驗準備

番紅固綠染色原理：改良番紅O-固綠軟骨染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨與堿性染料番紅O結(jié)合呈現(xiàn)紅色，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結(jié)合而成綠色或藍色，與呈現(xiàn)紅色的軟骨對比鮮明，從而將軟骨組織和骨組織區(qū)分開。番紅O是一種結(jié)合多陰離子的陽離子染料，其顯示軟骨組織是基于陽離子染料與多糖中陰離子基團（硫酸軟骨素或硫酸角質(zhì)素）結(jié)合。番紅O著色與陰離子的濃度近似成正比關(guān)系，間接反映了基質(zhì)中蛋白多糖的含量和分布。當軟骨受到損傷時，軟骨中的糖蛋白會釋放出來，使基質(zhì)成分分布不均勻，從而導致番紅O淡染或不著色。通過圖像分析軟件可對番紅O染色的軟骨基質(zhì)進行定量分析。

1、實驗儀器準備：組織脫水儀、石蠟或冰凍包埋儀、組織切片機、組織攤片/烤片機、光學顯微鏡/玻片掃描儀等

2、實驗試劑準備：番紅O-固綠軟骨染色液、中性樹膠、無水乙醇、二甲苯

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二、番紅固綠染色實驗步驟（以軟骨組織為例）
1、組織樣本脫蠟

（1） 70℃烤片30 min；

（2）二甲苯（I）中脫蠟10 min；

（3）二甲苯（II）中脫蠟10 min；

（4）100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

（5）100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；

2、組織樣本水化

（1）95%乙醇中水化5 min；

（2）85%乙醇中水化5 min；

（3）75%乙醇中水化5 min；

（4）蒸餾水中水化待用；

3、染色

（1）入新鮮配制的Weigert染液染色3-5min；

（2）流水沖洗2 min；

（3）酸性分化液分化15s；

（4）蒸餾水洗10min；

（5）在固綠染色液內(nèi)浸染5min；

（6）快速用弱酸溶液洗滌切片10-15s，以便去除殘留的固綠；

（7）入Saftanin O stain內(nèi)浸染5min；

4、脫水

（1） 95%乙醇脫水2-3s；

（2）無水乙醇脫水2-3s；

（3）無水乙醇脫水1 min；

5、透明

（1）二甲苯（I）透明2 min；

（2）二甲苯（II）再次透明2 min；

6、封片鏡檢

（1）在石蠟切片的中央滴加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封固。

（2）顯微鏡下拍照，或在組織掃描儀下進行玻片的全景掃描。

好啦，動物軟骨組織的番紅固綠染色實驗步驟咱們就講到這里啦，如果您還有其他的問題或有番紅固綠染色實驗外包的需求歡迎隨時咨詢~

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