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大家好，今天繼續(xù)跟普拉特澤生物一起學(xué)習(xí)巨噬細胞實驗中的——巨噬細胞極化實驗。巨噬細胞功能極化對機體抗病原菌感染及損傷修復(fù)的質(zhì)量和效率具有重要作用，巨噬細胞功能極化對機體抗病原菌感染及損傷修復(fù)的質(zhì)量和效率具有重要作用。巨噬細胞的分型、極化實驗都具有較高的實驗門檻，也很受到國自然項目的支持，因此很受各位科研人員的喜愛，普拉特澤生物流式檢測平臺專業(yè)為大家提供巨噬細胞實驗外包服務(wù)，一起來看看步驟吧！

免疫效應(yīng)細胞在免疫反應(yīng)中并非是表型單一的活化細胞，在局部微環(huán)境因素的影響下，活化的細胞分化成具有不同表型的亞細胞型。這些亞型細胞適應(yīng)局部環(huán)境同時又是局部環(huán)境不可或缺的組份。它們分布不同，表型特征有別:表達不同的表面分子，分泌不同細胞因子，功能也不同。典型的例子是Th細胞的極化，而近年來人們逐漸發(fā)現(xiàn)活化巨噬細胞有類似現(xiàn)象，成熟巨噬細胞能在各種因素誘導(dǎo)下出現(xiàn)表型和功能分化，即極化現(xiàn)象。

1、原代巨噬細胞的獲?。?/span>

（1）處死小鼠，用取骨鑷和手術(shù)剪。剪開小鼠皮膚，取小鼠兩條后腿并剔除骨上的肌肉，然后浸泡在含1%雙抗的PBS中。

（2）在小鼠腿骨的一段剪一個小口，然后用5mL含1%雙抗的PBS沖洗骨髓細胞。用1mL槍尖吸取沖洗的細胞液，100目濾膜過濾到新的離心管。然后300 xg ，離心5分鐘，去上清液。

（3）用1-5 mL紅細胞裂解液重懸細胞，冰上裂解5 min（期間適當(dāng)震蕩一下），300 xg 離心5分鐘去上清液。再用PBS清洗一次，并計數(shù)細胞數(shù)目，取1*106個細胞鋪6孔板每孔。

（4）用RMPI-1640完全培養(yǎng)基（10%胎牛血清，100x雙抗，M-CSF：10 ng/mL，1:10000稀釋原液）中培養(yǎng)。每兩天換一次液，培養(yǎng)一周后誘導(dǎo)出巨噬細胞。采用CD11b、F4/80流式抗體進行染色驗證。

2、巨噬細胞極化實驗：

（1）取對數(shù)生長期，狀態(tài)較好細胞（原代巨噬細胞或者RAW264.7細胞株）鋪板每孔1*106個細胞。

（2）加入LPS（100ng/mL）、INF-γ（40ng/mL）誘導(dǎo)為M1型巨噬細胞；加入IL-4（100ng/mL）誘導(dǎo)為M2型巨噬細胞。細胞因子同培養(yǎng)基一起加入。

（3）誘導(dǎo)12小時后。收集細胞，提RNA，RT-PCR檢測M1型關(guān)鍵標(biāo)志物：TNF-a、iNOS；M2型標(biāo)志物Arg-1的基因表達水平。

（4）或者收集細胞后，流式抗體染色M1型（染色抗體：CD11b、F4/80、CD86）；M2型巨噬細胞（抗體CD11b、F4/80、CD206）流式上機檢測。

那誘導(dǎo)巨噬細胞極化實驗介紹與步驟就說到這里啦，如果您對巨噬細胞還有更多的疑問研究或有巨噬細胞實驗外包得需求，歡迎隨時咨詢，普拉特澤生物一直在線的哦~

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