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考馬斯亮藍(lán)染色步驟全解析來(lái)啦！這可是生物科研實(shí)驗(yàn)中的“必備技能”快跟著普拉特澤生物的步伐，一起探索這個(gè)神奇的染色過(guò)程吧！

1）前期準(zhǔn)備

?電泳結(jié)束?：首先，通過(guò)SDS-PAGE電泳將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，電泳結(jié)束后，取出凝膠。

?清洗凝膠?：將凝膠放入加有超純水的平皿中潤(rùn)洗，以去除殘留的電泳液。如果凝膠較厚，可以適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和延長(zhǎng)洗滌時(shí)間，以去除凝膠中的干擾雜質(zhì)。

2）染色步驟

?Step1配制染色液：考馬斯亮藍(lán)染色液通常由亮藍(lán)G-250、甲醇、醋酸和去離子水組成。具體配方為：亮藍(lán)G-250 0.1%（w/v），甲醇50%（v/v），醋酸10%（v/v），去離子水余量。
將亮藍(lán)G-250溶解在甲醇中，加入醋酸，再加入去離子水，調(diào)整到最終體積。

?Step2?加入染色液?：將配制好的染色液倒入裝有凝膠的容器中，確保染色液完全浸沒(méi)凝膠。

?Step3?進(jìn)行染色?：將容器放在水平搖床上，室溫下震蕩染色。染色時(shí)間根據(jù)凝膠的厚度和所需染色深度進(jìn)行調(diào)整，通常為30分鐘至2小時(shí)。在染色過(guò)程中，要注意觀察凝膠的變色情況，避免染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致背景顏色過(guò)深。

3）脫色步驟

?1.配制去染液?：去染液通常由甲醇、醋酸和去離子水組成。具體配方為：甲醇40%（v/v），醋酸10%（v/v），去離子水余量。將甲醇和醋酸混合，再加入去離子水，調(diào)整到最終體積。

?2.倒出染色液?：染色結(jié)束后，倒出染色液或?qū)⑵浠厥找詡浜笥茫ㄍǔ？苫厥帐褂?次左右）。

?3.加入去染液?：將配制好的去染液倒入裝有凝膠的容器中，確保去染液完全浸沒(méi)凝膠。

?4.進(jìn)行脫色?：將容器放在水平搖床上，室溫下震蕩脫色。脫色時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行調(diào)整，通常為2-3小時(shí)或直至背景清晰。如果需要更低背景的凝膠，可以用純水脫色1小時(shí)以上或過(guò)夜。

4）觀察與記錄

?觀察結(jié)果?：將脫色后的凝膠放在顯微鏡下觀察，可以看到清晰的蛋白質(zhì)條帶。

?記錄結(jié)果?：使用相機(jī)或掃描儀將觀察結(jié)果記錄下來(lái)，以便后續(xù)分析和比較。

在操作過(guò)程中，需要注意以下幾點(diǎn)：

——考馬斯亮藍(lán)染色液呈酸性，有輕微腐蝕性，操作過(guò)程中一定要佩戴手套，避免染料接觸皮膚。

——考馬斯亮藍(lán)染料有毒性，不建議加熱使用。操作后需妥善處理廢棄物。

——染色前用純水清洗能大大減少SDS等干擾雜質(zhì)。

——染色后請(qǐng)盡快拍照，純水長(zhǎng)時(shí)間浸泡會(huì)導(dǎo)致蛋白和染料的流失。

怎么樣？考馬斯亮藍(lán)染色步驟全解析就到這里啦！是不是很簡(jiǎn)單呢？下次再做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，不妨按照這些步驟來(lái)操作一下~如果在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到技術(shù)問(wèn)題
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