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        考馬斯亮藍(lán)染色法介紹由普拉特澤生物分享，在蛋白質(zhì)染色方法中，目前以考馬斯亮藍(lán)染色最為常用，因?yàn)樗瓤朔税被谌旧`敏度不高的限制，又比銀染簡(jiǎn)便易操作。普拉特澤的生物病理實(shí)驗(yàn)平臺(tái)長(zhǎng)期為廣大生物醫(yī)學(xué)人員提供考馬斯亮藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)。

        1、考馬斯亮藍(lán)染色介紹

        考馬斯亮藍(lán)染色是用考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行蛋白質(zhì)染色的方法?？捡R斯亮藍(lán)是一種陰離子染料， 常用考馬斯亮藍(lán)G250和R250?？捡R斯亮藍(lán) G250在游離狀態(tài)下呈紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì) 通過(guò)疏水結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，蛋白質(zhì)-色素結(jié) 合物在595 nm波長(zhǎng)下有最大光吸收。其光 吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。

        2、考馬斯亮藍(lán)染色的歷史

        考馬斯亮藍(lán)染色最早由 Fazekas 等在 1963 年用于醋酸纖維素膜電泳，并認(rèn)為同樣可用于紙電泳，瓊脂糖電泳和淀粉凝膠電泳。1965 年 Meyer 等將此方法應(yīng)用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。

        3、考馬斯亮藍(lán)染色的靈敏度

        考馬斯亮藍(lán)染色可以達(dá)到 0.2~0.5 μg（200~500 ng），最低可檢出 0.1 μg蛋白；銀染的靈

        敏度比考染高將近 100 倍，最低可以檢出 2 ng 蛋白，通過(guò)考染條帶的深淺粗細(xì)，可以大致判斷該條帶有多少蛋白。

        4、考馬斯亮藍(lán)染料的種類(lèi)

        考馬斯亮藍(lán)分為 R-150、R-250、R-350、G-250 等。其中 R-350 最為靈敏，R 為紅藍(lán)色，G為綠藍(lán)色。R-250 即三苯基甲烷，每個(gè)分子含有兩個(gè) SO3H 基團(tuán)，偏酸性，與氨基黑一樣也是結(jié)合到蛋白質(zhì)的堿性基團(tuán)上。G-250 即二甲花青亮藍(lán)，是一種甲基取代的三苯基甲烷。

        推薦一種考染的方法

        ⑴ 電泳后的凝膠立即浸泡在固定液（500 ml 乙醇，100 ml 冰醋酸，400 ml 蒸餾水）中

        至少 30 min，如有必要可在固定液中浸泡過(guò)夜；

        ⑵ 將固定后的凝膠在熱的染色液（0.29 g 考馬斯亮藍(lán)溶解在 250 ml 脫色液中，在使用前

        邊攪拌邊加熱至 60℃）中浸泡 10 min，然后用蒸餾水將凝膠淋洗一次；

        ⑶ 多次變換脫色液（250 ml 乙醇，80 ml 冰醋酸，加蒸餾水至 1 L），直至凝膠背景脫凈

        為止，為加快脫色，可略加溫度；以上各步最好用振蕩器（搖床）震蕩染色皿。

        ⑷ 為了防止凝膠干燥后的龜裂，脫去背景色的凝膠在保存液（25 ml 87% 甘油加 225 ml 脫

        色液）中浸泡 30 min。然后將凝膠放在玻璃板上，再用保存液浸濕玻璃紙包住凝膠在室溫下晾干。

        如果您也準(zhǔn)備考馬斯亮藍(lán)染色的考馬斯亮藍(lán)染色的方法不是唯一的，你可以參考幾種之后總結(jié)一個(gè)適合自己的方案出來(lái)，有什么不懂得歡迎隨時(shí)給普拉特澤留言~