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沒(méi)日沒(méi)夜地忙了五天，終于可以穩(wěn)定地重復(fù)實(shí)驗(yàn)了！為了幫助大家少走彎路，普拉特澤生物寫(xiě)了一篇瓊脂糖凝膠電泳的步驟教程。雖然瓊脂糖凝膠電泳是一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，沒(méi)有太多繁瑣的步驟，但每次跑電泳還是挺費(fèi)時(shí)間的。尤其是在配膠這一步，很容易踩坑。希望這篇教程能幫到大家，讓你們少踩坑，多成功！

?一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備?

在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，首先需要用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，確保無(wú)雜質(zhì)殘留。隨后，將模具放置在制膠平板上，并架好梳子，為后續(xù)的凝膠制備做好準(zhǔn)備。

①?凝膠緩沖液配制?：根據(jù)欲分離的DNA片段大小，用凝膠緩沖液（如TAE或TBE）配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠。一般而言，常用濃度為0.5%至2%，但具體濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求確定。

二、凝膠制備

?㈠瓊脂糖溶解?：準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉，加入配制的三角燒瓶?jī)?nèi)，再加入適量的電泳緩沖液。放入微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖完全溶解，期間需不時(shí)搖動(dòng)燒瓶以防溢出。

㈡凝膠冷卻與染料添加?：待瓊脂糖溶液冷卻至適宜溫度（約60℃左右，不燙手），加入適量的核酸染料（如EB或GelRed），輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液。注意，EB存在毒性，操作時(shí)應(yīng)佩戴防護(hù)手套。

㈢鋪膠?：將冷卻后的凝膠溶液緩緩倒入已準(zhǔn)備好的模具中，注意避免產(chǎn)生氣泡。室溫下靜置約20-30分鐘，直至凝膠完全凝結(jié)。

三、電泳前準(zhǔn)備

?①梳子拔出與凝膠放置?：凝膠凝固后，小心拔出梳子，避免破壞凝膠。將凝膠放置在電泳槽內(nèi)，確保樣品孔位于電場(chǎng)負(fù)極一側(cè)。

②電泳緩沖液加入?：向電泳槽中倒入適量的電泳緩沖液，液面應(yīng)略高于凝膠表面，約1mm左右。檢查樣品孔內(nèi)是否有氣泡，并設(shè)法去除。

四、上樣與電泳

?①樣品準(zhǔn)備?：在DNA樣品中加入適量的Loading Buffer，混勻后使用加樣器將混合液緩慢加入凝膠的樣品孔中。注意避免樣品溢出或污染其他孔。

?②電泳設(shè)置?：接通電源，設(shè)置電泳參數(shù)。一般情況下，電壓可設(shè)置為50V至120V不等，電泳時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求確定。DNA樣品在電場(chǎng)作用下由負(fù)極向正極移動(dòng)。

五、電泳后處理

㈠?觀察結(jié)果?：電泳結(jié)束后，關(guān)閉電源。取出凝膠，在凝膠成像儀或紫外分析儀上觀察電泳結(jié)果。DNA存在處會(huì)顯示出亮色熒光條帶（如EB為橙紅色，GelRed為紅色或綠色），通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)的核酸Marker比較，可以估算出擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。

㈡數(shù)據(jù)記錄與分析?：記錄并分析電泳結(jié)果，根據(jù)需要進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或數(shù)據(jù)處理。
六、注意事項(xiàng)

①凝膠濃度選擇應(yīng)根據(jù)樣品DNA分子大小而定。

②操作過(guò)程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，以免影響電泳結(jié)果。

③微波爐加熱瓊脂糖時(shí)需小心操作，以防突然產(chǎn)生氣泡導(dǎo)致溢出。

④EB等核酸染料具有毒性，操作時(shí)應(yīng)佩戴防護(hù)手套。

⑤電泳緩沖液多次使用后應(yīng)及時(shí)更換，以免影響電泳效果。

通過(guò)以上步驟，可以完成瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，對(duì)DNA片段進(jìn)行分離、鑒定和純化。

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