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普拉特澤生物為廣大生命科學(xué)研究人員提供可根據(jù)TUNEL檢測不同的實驗報告步驟，本文就跟大家一起繼續(xù)探究采用TUNEL染色技術(shù)檢測組織樣本中的細胞凋亡水平。
一、實驗樣本及分組

樣本：大鼠腦

二、實驗結(jié)果

圖1 tunel染色示意圖 100X

三、實驗結(jié)論

凋亡/陽性細胞呈深棕色。
四、實驗材料

1. 主要儀器

2.主要試劑

一、實驗原理

細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180~200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上生物素標記的dUTP，在DAB的存在下，產(chǎn)生很強的顏色反應(yīng)（呈深棕色），從而可以通過顯微鏡檢測細胞凋亡的情況。
二、方法步驟

1.脫蠟

1) 65℃烤片2 h；

2) 二甲苯（I）中脫蠟10 min；

3) 二甲苯（II）中脫蠟10 min；

4) 100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

5) 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯。

2.水化

1) 95%乙醇中水化5 min；

2) 85%乙醇中水化5 min；

3) 75%乙醇中水化5 min；

4) 蒸餾水中水化待用。

3.通透

1) 蛋白酶K修復(fù)：每個樣本上滴加100 μL蛋白酶K工作液，37℃反應(yīng)30 min；

2) PBS浸洗3次各5 min。

4. 標記

1) 每樣滴加50μL的Tunel反應(yīng)混合物，37℃避光孵育60 min；

2) PBS充分浸洗3次各5 min；

3) 每個樣本滴加50 μL converter-POD工作液，濕盒中37℃避光反應(yīng)30 min；

4) PBS充分浸洗3次各5 min。

5. 顯色

1) 根據(jù)說明書配制DAB顯色液；

2) 每個樣本滴加50 μL DAB顯色工作液，室溫顯色30 s；

3) 蒸餾水稍洗終止顯色。

6.復(fù)染

1) 蘇木素染色30 s；

2) 流水沖洗2 min。

7.分化返藍

1) 1%鹽酸酒精分化2 s；

2) 流水沖洗切片5 min。

8.脫水

1) 蒸餾水過洗1~2 s；

2) 85%乙醇脫水5 min；

3) 95%乙醇脫水5 min；

4) 無水乙醇脫水5min；

5) 無水乙醇脫水5 min。

9.透明

1) 二甲苯（I）透明5 min；

2) 二甲苯（II）再次透明5 min。

10.封片

1) 在石蠟切片的中央滴加適量中性樹膠，蓋上蓋玻片封固；

2) 在通風(fēng)櫥內(nèi)室溫晾干。

11.鏡檢

1) 顯微鏡下觀察拍照。

今天關(guān)于TUNEL染色就分享到這兒啦~如果您在實驗過程中遇到技術(shù)問題，或者需要實驗外包和代做，可與我們技術(shù)老師聯(lián)系18570028002（微信同號）