非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型評估指南：精準檢測脂質(zhì)積累與氧化應激的8大方法
2025-04-16 17:33:08
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型評估指南由普拉特澤生物動物檢測平臺總結(jié)分享，動物檢測平臺為廣大科研實驗人員提供非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型外包實驗服務
可以準確評估肝臟脂質(zhì)積累和氧化應激水平是研究其發(fā)病機制的關鍵。本篇將深入解析評估NAFLD模型脂質(zhì)代謝和氧化應激的8大核心技術，從基礎檢測到前沿方法，助您獲得可靠實驗數(shù)據(jù)
一、脂質(zhì)積累評估：4大金標準檢測方案
1. 組織油紅O染色（定性分析黃金標準）
⒈操作要點：
冰凍切片厚度8μm
60%異丙醇預處理1分鐘
油紅O工作液染色15分鐘（避光）
⒉結(jié)果判讀：
陽性信號：鮮紅色脂滴
推薦ImageJ軟件定量分析（≥5個視野）
數(shù)據(jù)參考：正常肝組織染色陽性率<5%，NAFLD模型通常>30%
2. 肝臟甘油三酯(TG)定量檢測（最可靠定量方法）
▲提取方法：
氯仿:甲醇(2:1)混合提取
超聲破碎提高提取效率
▲檢測建議：
比色法（GPO-PAP試劑盒）
同步檢測總膽固醇(TC)
▲判定標準：NAFLD模型TG含量通常>20mg/g肝組織
3. 小動物MRI-PDFF（無創(chuàng)定量新技術）
●技術優(yōu)勢：
可重復動態(tài)監(jiān)測
空間分辨率達0.1mm3
●參數(shù)設置：
TE=2.3ms，TR=150ms
脂肪分數(shù)>5%判定異常
4. 質(zhì)譜成像（空間脂質(zhì)組學）
●應用價值：
定位特定脂質(zhì)分布
發(fā)現(xiàn)差異脂質(zhì)分子
●樣本處理：
新鮮冰凍切片
避免使用固定劑
二、氧化應激評估：4大關鍵指標系統(tǒng)
1. 丙二醛(MDA)檢測（脂質(zhì)過氧化標志）
檢測方法：
TBA比色法（532nm吸光度）
需新鮮組織避免降解
結(jié)果解讀：
①NAFLD模型通常升高2-3倍
②正常范圍：1-2nmol/mg蛋白
2. 超氧化物歧化酶(SOD)活性
檢測原理：
抑制WST-1還原反應
單位定義：50%抑制率為一個活性單位
臨床意義：
NAFLD患者常降低30-50%
3. 谷胱甘肽系統(tǒng)（GSH/GSSG比值）
樣本處理：
預冷PBS沖洗
加入5%磺基水楊酸穩(wěn)定
檢測要點：
DTNB法測總GSH
酶循環(huán)法測GSSG
判定標準：健康肝臟GSH/GSSG>10:1
4. 8-OHdG檢測（DNA氧化損傷標志）
先進方法：
ELISA檢測（靈敏度0.1ng/ml）
免疫組化定位
科研價值：
早期氧化損傷敏感指標
與纖維化程度正相關
三、實驗設計關鍵點
⒈樣本采集標準化流程
⑴禁食處理：統(tǒng)一禁食6小時
⑵取材時間：固定上午8-10點
②分裝保存：
生化檢測：-80℃速凍
氧化指標：液氮速凍后-80℃保存
2. 質(zhì)量控制措施
內(nèi)參設置：
蛋白濃度校正（BCA法）
組織重量歸一化
技術重復：≥3次獨立實驗
3. 數(shù)據(jù)關聯(lián)分析
脂質(zhì)-氧化應激相關性：
TG含量與MDA水平Pearson分析
油紅O陽性率與SOD活性回歸分析
四、前沿技術展望
單細胞脂質(zhì)組學：
揭示肝細胞異質(zhì)性
10x Genomics平臺應用
活體自由基成像：
新型分子探針（如MitoSOX）
雙光子顯微鏡觀察
多組學整合分析：
⑴轉(zhuǎn)錄組+代謝組聯(lián)合
⑵機器學習模型預測
五、常見問題解決方案
1. 脂質(zhì)提取不完全
優(yōu)化方案：
增加超聲破碎（冰浴，30%功率）
延長提取時間至24h
2. 氧化指標不穩(wěn)定
應對措施：
全程冰上操作
添加蛋白酶抑制劑
分裝避免反復凍融
3. 組間差異大
改進方法：
統(tǒng)一取材部位（肝左葉）
增加樣本量（n≥8）
標準化飼養(yǎng)條件
結(jié)語：4步構(gòu)建完美評估體系
①多方法驗證：組織染色+生化定量+影像學
②動態(tài)監(jiān)測：設立多個時間點
③全程質(zhì)控：標準化操作流程
④機制關聯(lián)：整合脂質(zhì)代謝與氧化應激數(shù)據(jù)
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