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實(shí)時(shí)熒光定量PCR操作注意事項(xiàng)由普拉特澤的生物表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)總結(jié)分享。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光報(bào)告系統(tǒng)，利用熒光信號(hào)的變化對(duì)PCR過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量檢測(cè)的一項(xiàng)非常精密的技術(shù)，實(shí)驗(yàn)過程中稍有不慎就會(huì)有實(shí)驗(yàn)結(jié)果上的偏差，導(dǎo)致結(jié)果分析不出來或異常，本文咱們?cè)敿?xì)扒一扒，熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)過程中有哪些注意事項(xiàng)，怎樣能把實(shí)驗(yàn)做到盡善盡美：

1、熒光定量PCR操作注意點(diǎn)：

　　（1）實(shí)驗(yàn)室注意分區(qū)：試劑準(zhǔn)備間，樣本處理間，PCR室，電泳間要有明確區(qū)分，各房間實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)服不得混用；

　　（2）試劑準(zhǔn)備間及樣本處理間不處理實(shí)驗(yàn)相關(guān)的高濃度的核酸模板（如高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，PCR產(chǎn)物，miRNA的minics等）；

　　（3）減少頻繁多次的走動(dòng)，尤其去過電泳間之后當(dāng)天不可進(jìn)入其他房間；

　　（4）使用生物安全柜加樣，不同位置的移液器不可混用，不要隨意更換其位置；

　　（5）在檢測(cè)體系中添加UNG酶系統(tǒng)用于避免PCR產(chǎn)物的污染。

　　2、試劑質(zhì)量控制：

　　對(duì)每批次配制或購買的試劑進(jìn)行質(zhì)檢，保證試劑的性能穩(wěn)定可控，均一。

　　3、試劑使用注意事項(xiàng)：

　　試劑使用前必須混勻。

　　4、移液器操作注意事項(xiàng)：

　　使用結(jié)束后調(diào)整至大量程，取樣時(shí)槍頭深入頁面的深度盡量一直保持在1-2 mm之間，避免外壁沾過多試劑隨加樣進(jìn)入導(dǎo)致重復(fù)性不好。

　　5、反應(yīng)液配制及注意事項(xiàng)：

　　加樣使用合適量程的移液器；對(duì)于較小體積的移液，取液時(shí)候，不可深入液體太多以免試劑沾到吸頭外壁至移液量不準(zhǔn)確，深入1-2 mm即可（尤其是粘稠試劑，如酶，甘油等）；

　　小體積試劑加樣務(wù)必：取液后眼觀是否取到液體，加樣務(wù)必浸入混合液以下吹吸數(shù)次，棄吸頭前眼觀確定吸頭中無殘留。

　　6、反應(yīng)液分裝及注意事項(xiàng)：

　　反應(yīng)液分裝前必須混勻（比如渦旋震蕩或移液器吹吸混勻）再分裝；反應(yīng)液第一個(gè)孔分裝必須潤(rùn)一下槍頭，96孔之間加樣間隔時(shí)間盡量保持一致，96孔的點(diǎn)樣位置盡量保持在96孔的相同位置，復(fù)孔之間盡量相鄰點(diǎn)樣，點(diǎn)樣按照一定的順序，吸取時(shí)槍頭深入頁面的深度盡量一直保持在1-2mm之間；

加樣使用移液器鑲緊移液器吸頭，每次按至第一檔即可，不可按至第二檔，避免氣泡產(chǎn)生和加樣不準(zhǔn)確（注：這個(gè)并不是使加樣準(zhǔn)確的方式，只要保持所有孔的加樣方式相同，可減少加樣誤差；）加樣盡量勻速，不要加樣到孔外面，以免對(duì)后面封膜造成影響。

好啦，那關(guān)于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)的操作注意事項(xiàng)咱們就講到這里啦，如果您還有更多的問題，可以直接留言，技術(shù)會(huì)一個(gè)一個(gè)耐心回答哦！如果您有熒光定量PCR代做與外包的需求歡迎選擇普拉特澤生物。

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