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ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)操作常見(jiàn)問(wèn)題處理方法【干貨滿滿】

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問(wèn)題一：ELISA試驗(yàn)出現(xiàn)非常弱的結(jié)果，其可能原因和處理的方法如下：

可能原因1：溫育的時(shí)間或者溫度不夠;

解決方法：校正溫育箱溫度。

可能原因2：顯色反應(yīng)時(shí)間太短;

解決方法：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。

可能原因3：所用配制緩沖液的蒸餾水有問(wèn)題:

解決方法：使用新鮮合格的蒸餾水。

可能原因4：加入抗體/酶的稀釋液濃度太低:

解決方法：按照說(shuō)明書保存試劑盒和準(zhǔn)確配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密。

可能原因5：酶標(biāo)儀濾光片不正確:

解決方法：檢查酶標(biāo)儀使用的濾光片。

可能原因6：試劑盒沒(méi)有充分平衡;

解決方法：試劑室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫。

可能原因7：不正確的試劑儲(chǔ)存方式:

解決方法：按照說(shuō)明書要求保存試劑盒。

問(wèn)題二：ELISA試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定的重復(fù)性差，原因和處理方法如下：

可能原因1：加樣本及試劑量不準(zhǔn);孔間不一致

解決方法：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密；重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與第一次接近；重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件，人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性；樣品稀釋前應(yīng)充分混勻。

可能原因2：加樣過(guò)快，孔間發(fā)生污染;

解決方法：重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性;加樣不要過(guò)快。

可能原因3：加錯(cuò)樣本;

解決方法：檢查記錄和試劑，是否加錯(cuò)樣本。

可能原因4：加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁上部非包被區(qū)

解決方法：加樣槍頭不要貼壁。

可能原因5：不同批號(hào)試劑盒中組分混用;

解決方法:：不同批號(hào)試劑盒中組分不可混用。

可能原因6：溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致

解決方法:檢查時(shí)間是否一致。

問(wèn)題三：ELISA試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽(yáng)性對(duì)照不顯色，怎么辦?

可能原因1：漏加或者誤加試劑;

解決方法:：檢查試驗(yàn)記錄和剩余試劑。每次加液前均應(yīng)核對(duì)標(biāo)簽。

可能原因2：洗板液配制中出現(xiàn)問(wèn)題，如量筒不干凈含HRP酶抑制物(疊氨鈉等)

解決方法：使用干凈的器皿，正確配制試劑。

可能原因3：溫育的時(shí)間或溫度不夠;

解決方法:：校正溫育箱溫度。:

可能原因4：標(biāo)準(zhǔn)品失活或者丟失;

解決方法：標(biāo)準(zhǔn)品正確保存、溶解和混勻。

可能原因5：抗體失活或者丟失;

解決方法:：更換抗體或者提高抗體濃度

可能原因6：酶失活或者丟失

檢查方法：把工作濃度的酶再稀釋20-100倍，取5uL加入50ul的顯色底物，終止后顯色是否能達(dá)到10左右，此為酶的粗略估計(jì)。

解決方法：更換酶或者提高酶的濃度。

問(wèn)題四：ELISA試驗(yàn)結(jié)果空白背景高，怎么處理？

可能原因1：洗板不干凈;

解決方法：充分洗滌，徹底拍干:洗板要防止交叉污染:濃縮洗液準(zhǔn)確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。

可能原因2：顯色液變質(zhì)或者試劑過(guò)期;

解決方法：檢查試劑盒有效期。

可能原因3：ELISA檢測(cè)試劑稀釋有誤，如加酶的濃度過(guò)高:

解決方法：請(qǐng)按說(shuō)明書所示稀釋倍數(shù)配制:

可能原因4：蒸餾水受酶等污染;

解決方法:：使用新鮮蒸餾水;

可能原因5：試劑混用;

解決方法:：不同批號(hào)試劑勿混用。

可能原因6：培養(yǎng)箱溫度超過(guò)37℃或反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

解決方法:：顯色反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)縮短。
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ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)——簡(jiǎn)介
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——實(shí)驗(yàn)步驟
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——注意事項(xiàng)
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——常見(jiàn)問(wèn)題

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