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膿毒癥（Sepsis）是臨床常見的危重癥，其病理機制復(fù)雜，涉及全身炎癥反應(yīng)、免疫失衡及多器官功能障礙，構(gòu)建可靠的動物模型是研究膿毒癥發(fā)病機制和藥物療效的關(guān)鍵~普拉特澤生物動物實驗平臺專業(yè)承接膿毒癥模型、裸鼠成瘤實驗外包、肝纖維化等動物實驗代做服務(wù)，積累專業(yè)豐富的實驗操作經(jīng)驗。上期我們分享膿毒癥動物模型實驗常見問題與解決方案大家都說不夠詳細，實驗過程中操作不當(dāng)、模型選擇錯誤或術(shù)后管理疏漏均可能導(dǎo)致實驗失敗。那今天咱們就為大家專門出一期基于最新研究與實踐經(jīng)驗，總結(jié)膿毒癥動物模型實驗的核心注意事項，幫助科研人員規(guī)避風(fēng)險、提升實驗成功率

一、模型選擇：CLP vs LPS，如何科學(xué)決策？

膿毒癥動物模型主要包括盲腸結(jié)扎穿孔（CLP）模型和脂多糖（LPS）誘導(dǎo)模型，兩者各有優(yōu)劣（表1）：

模型類型 CLP模型 LPS模型原理通過結(jié)扎盲腸并穿孔引發(fā)多菌性腹膜炎，模擬臨床膿毒癥病理過程168 腹腔注射LPS（內(nèi)毒素）激活全身炎癥反應(yīng)，操作簡便28 適用研究多器官功能障礙、免疫失衡、藥物療效評估急性炎癥反應(yīng)、細胞因子風(fēng)暴機制研究優(yōu)缺點更貼近臨床，但操作復(fù)雜、死亡率高36 重復(fù)性好、成本低，但難以模擬膿毒癥晚期免疫抑制

選擇建議：

CLP模型：適用于需要模擬臨床多菌性感染及器官衰竭的研究，需重點關(guān)注結(jié)扎長度（如結(jié)扎50%-60%盲腸可誘導(dǎo)中度膿毒癥）和穿孔針規(guī)格（19G針頭增加死亡率）。

LPS模型：適合快速篩選抗炎藥物，需根據(jù)動物品系調(diào)整劑量（如C57BL/6小鼠常用5-10 mg/kg）

二、實驗操作中的“致命細節(jié)”

1. CLP模型操作要點

麻醉與無菌：推薦使用異氟烷或戊巴比妥鈉麻醉，避免麻醉過深導(dǎo)致術(shù)中死亡。手術(shù)器械需高溫滅菌，術(shù)區(qū)剃毛后用碘伏消毒，降低感染風(fēng)險。

盲腸處理：

①結(jié)扎位置需避開回盲瓣，保持腸道連續(xù)性。

②穿孔后輕擠盲腸排出少量糞便（約1滴），確保穿孔通暢但避免過度污染腹腔。

③縫合與復(fù)蘇：采用4-0可吸收縫線分層縫合腹膜及皮膚，術(shù)后立即腹腔注射預(yù)熱生理鹽水（50 mL/kg）并放置于37℃溫墊復(fù)蘇。

2. LPS模型關(guān)鍵參數(shù)

①劑量控制：過高劑量（如>20 mg/kg）易致急性死亡，建議預(yù)實驗確定最佳劑量。

②注射方式：腹腔注射需避開臟器，避免直接損傷；靜脈注射適用于快速誘導(dǎo)全身反應(yīng)。

三、術(shù)后管理：決定模型穩(wěn)定性的隱形因素

□鎮(zhèn)痛與補液

CLP術(shù)后24小時內(nèi)皮下注射丁丙諾啡（0.05 mg/kg）緩解疼痛，減少應(yīng)激反應(yīng)。

每日補充5%葡萄糖鹽水（1-2 mL/只），維持水電解質(zhì)平衡。

□環(huán)境控制

保持溫度（25±1℃）和濕度（50%-60%），使用無塵墊料減少感染風(fēng)險。

單獨飼養(yǎng)術(shù)后動物，避免同類攻擊導(dǎo)致傷口裂開。

□監(jiān)測指標

①生存率：CLP模型需記錄48小時存活率（中度膿毒癥約50%-60%）。

②生理指標：體溫（膿毒癥早期常升高，晚期降低）、呼吸頻率（>150次/分鐘提示呼吸窘迫）。

③行為學(xué)評分：采用小鼠膿毒癥評分（MSS），評估豎毛、活動度、眼分泌物等。

四、數(shù)據(jù)驗證：從表型到機制的全面分析

▲生化與炎癥指標

→血液檢測：白細胞計數(shù)（WBC）、中性粒細胞/淋巴細胞比值（NLR）、CRP、PCT2。

→細胞因子：ELISA檢測TNF-α、IL-6、IL-10水平，反映炎癥與免疫抑制狀態(tài)。

▲組織病理學(xué)

→肝、腎、肺組織HE染色，觀察炎性細胞浸潤、水腫及壞死。

→免疫組化檢測器官中NF-κB、HMGB1等炎癥通路標志物表達。

▲模型驗證標準

→CLP模型：術(shù)后12小時出現(xiàn)菌血癥，18-24小時死亡率顯著上升。

→LPS模型：注射后6小時血清TNF-α達峰值，24小時IL-6持續(xù)升高。

五、倫理與可重復(fù)性：不可忽視的科研底線

倫理規(guī)范

→遵循3R原則（替代、減少、優(yōu)化），術(shù)前通過動物倫理委員會審批。

→采用二氧化碳安樂死，避免不必要的痛苦8。

可重復(fù)性保障

→詳細記錄操作參數(shù)（如結(jié)扎盲腸長度、針頭型號、LPS批號）。

→設(shè)立假手術(shù)組（僅開腹不結(jié)扎）和陽性對照組（如地塞米松干預(yù)），確保數(shù)據(jù)可比性。

結(jié)語

構(gòu)建膿毒癥動物模型是一項高度精細的工作，從模型選擇到數(shù)據(jù)驗證的每個環(huán)節(jié)均需嚴格把控。CLP模型雖操作復(fù)雜，但更貼近臨床；LPS模型則適用于機制初探。
通過優(yōu)化術(shù)后管理、規(guī)范數(shù)據(jù)采集，并結(jié)合多維度驗證，可顯著提升實驗的可靠性與論文發(fā)表價值

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