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肝纖維化模型

肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展至肝硬化的共同病理學基礎,雖然對肝纖維化的研究已從細胞水平進入分子水平,但肝纖維化動物模型的建立,仍是臨床研究和實驗研究的重點和難點。肝纖維化動物模型的建立,既可以深入全面地研究肝纖維化發(fā)病機制,又可以為臨床篩選防治肝纖維化藥物提供基礎研究。

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實驗介紹

【應用簡介】

肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展至肝硬化的共同病理學基礎,雖然對肝纖維化的研究已從細胞水平進入分子水平,但肝纖維化動物模型的建立,仍是臨床研究和實驗研究的重點和難點。肝纖維化動物模型的建立,既可以深入全面地研究肝纖維化發(fā)病機制,又可以為臨床篩選防治肝纖維化藥物提供基礎研究。


【肝纖維化模型構建】

目前肝纖維化動物模型可分為基因相關模型與非基因模型,前者主要是指工程動物模型,非基因模型主要指在相同或相似的遺傳背景下,通過環(huán)境因素,藥物/毒物或其它因素誘導得到的肝纖維化模型。

肝纖維化常用模型有化學試劑誘導法(四氯化碳誘導,硫代乙酰胺誘導),膽管阻塞法(膽管結扎或寄生蟲),乙醇誘導法以及免疫法。



【實驗方法】

一、化學試劑誘導法

致病機理:

四氯化碳在肝細胞內(nèi)經(jīng)CYP2E1代謝產(chǎn)生的自由基可以損傷細胞膜,從而破壞肝細胞的結構和功能,造成肝細胞壞死。同時,肝臟內(nèi)的星型細胞會活化,釋放Ⅳ型膠原酶,降解ⅳ型膠原,合成分泌ⅰ型膠原,而引起膠原沉積和肝纖維化。

動物準備:

雄性的BALB / c小鼠10周齡(BALB / C比C57敏感,造模成功率更高)或SD大鼠(雄性200克左右)等,橄欖油,四氯化碳,注射器,電子天平。

實驗步驟:

1、配制四氯化碳溶液,四氯化碳與橄欖油按照體積比1:4混勻,備用;

2、按小鼠體重0.5μl/ g CCl4(2.5μlCCl4橄欖油溶液)腹腔注射,每周2次,持續(xù)6周??瞻讓φ战M僅注射橄欖油2.5μl/ g;

3、在連續(xù)給CCl4 2周后,可隨機抽取對照組和造模組小鼠各3只,檢測ALT,AST,TBL以及切片等是否造模成功;

如圖4所示,若模型成功,即可進行藥物評價,繼續(xù)處理4周后,即可處死小鼠,檢測肝纖維化相關的標記,評價藥物效果。


二、膽管結扎致肝纖維化

致病機理:

通過手術結扎膽總管的方法,模擬臨床上由于膽汁淤塞引起的肝疾病。

動物準備:

雄性C57,只BALB / c小鼠(10周齡左右)或雄性SD大鼠(200克左右)器械:擴創(chuàng)鉤,鑷子,尖頭剪刀,持針鉗,圓針,角針,鈍性剪刀,刀柄,創(chuàng)巾,棉簽,剃毛刀,酒精棉球,碘伏,注射器,縫合線(3號)。

實驗步驟:

1、術前麻醉,固定;

2、術部剃毛,擦碘伏,75%酒精脫碘,鋪創(chuàng)巾;

3、沿腹中線剪開皮膚,鈍性剪刀分離皮下的脂肪和肌肉;

4、皮膚上開到尖狀軟骨處,拉牽引線,生理鹽水沖洗腹腔,擴創(chuàng)鉤使皮膚兩側撐開;

5、棉簽沾生理鹽水撥開肝臟,腸,胰等臟器,在肝臟底部尋找并暴露出膽管(大鼠沒有膽囊,在肝臟和十二指腸中間找,小鼠沿著膽囊和十二指腸找)膽管下可看到門靜脈血管,與門靜脈血管平行的透明黃色的為膽管如下圖所示:

6、用鑷子撥開膽管覆蓋及周邊的脂肪(一定要剝離干凈周邊的脂肪,否則容易造成結扎線滑脫),找到后把鑷子伸到膽管下方撥開脂肪,絲線穿過鑷子,在膽管處打結,可扎2道防止造模不成功,生理鹽水沖洗腹腔;

7、將內(nèi)臟歸位,先把腹膜縫在一起,然后再將皮膚縫合;

8、每天碘伏消毒,75%酒精亦可;

9、對照組與結扎組操作一致,僅不扎線。

圖片介紹


【實驗流程圖】

1594028419604308.png



【優(yōu)秀案例圖】


肺纖維化 100X_副本_副本.jpg


技術總結

【常見問題】

1、滴注博來霉素后短時間內(nèi)小鼠死亡

答:可能原因如下,a、藥物濃度偏高;b、滴注體積過大;c、麻醉過量致死;d、氣管縫合時有血液滲入導致小鼠死亡。


【注意事項】

1、滴注后應將小鼠頭部抬起,使藥物緩緩滲入氣管、支氣管;

2、選擇合適周齡的小鼠進行試驗。

送檢與交付標準

【交付標準】

固定組織、實驗報告


【送檢流程】

動物及藥物代采購

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