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細(xì)胞周期檢測

體外培養(yǎng)細(xì)胞 生長、分裂繁殖的能力,可用分裂指數(shù)來表示。它與生長曲線有一定的聯(lián)系,如隨著分裂指數(shù)的不斷提高,細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生長期。分裂指數(shù)指細(xì)胞 群體中分裂細(xì)胞 所占的百分比,它是測定細(xì)胞 周期的一個重要指標(biāo),也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。

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實(shí)驗(yàn)介紹

【技術(shù)原理】

流式利用不同熒光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體,與待測成分作用,然后上流式細(xì)胞儀檢測待測細(xì)胞。待測細(xì)胞隨流動室內(nèi)的流動鞘液排列成單列,一個個迅速通過激光聚焦區(qū),激光在對每個細(xì)胞進(jìn)行照射時可同時得到前向角散射和側(cè)向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標(biāo)記物發(fā)出的信號,利用這些信號,可計算出相對含量,從而得到細(xì)胞群的相對比值。

細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細(xì)胞在分裂結(jié)束后暫時離開細(xì)胞周期,停止細(xì)胞分裂,執(zhí)行一定生物學(xué)功能(G0期)。由于細(xì)胞周期各時相的DNA含量不同,通常正常細(xì)胞的G1/ G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結(jié)合,其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此,通過流式細(xì)胞儀PI染色法對細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)行檢測時,可以將細(xì)胞周期各時相區(qū)分為G1/G0期,S期和G2/M期。  


【實(shí)驗(yàn)方法】

Step1:細(xì)胞培養(yǎng) 

Step2:轉(zhuǎn)染或藥物處理 

Step3:細(xì)胞收集

Step4:加周期試劑 

Step5:上機(jī)檢測

案例展示


在施加藥物后,細(xì)胞周期明顯阻滯。 

技術(shù)總結(jié)

1、考慮到進(jìn)行流式時需要用到對照組細(xì)胞設(shè)置空白組(用于調(diào)節(jié)電壓)和單染組細(xì)胞(用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償),因此要求該組細(xì)胞量較其他組多;

2、如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度偏低,細(xì)胞量較少,則適當(dāng)增加離心時間。收集細(xì)胞時,應(yīng)該連同上清一起收集,同時胰酶消化時間不宜過長,否則容易引起假陽性;

3、檢測細(xì)胞經(jīng)過轉(zhuǎn)染等處理后可能會帶有自發(fā)熒光,應(yīng)注意選擇凋亡試劑盒的顏色通道 如:帶綠色熒光時,應(yīng)選擇7AAD試劑盒;

4、細(xì)胞鋪板應(yīng)選擇細(xì)胞狀態(tài)良好的時候進(jìn)行,且避免因反復(fù)吹打形成機(jī)械損傷,而出現(xiàn)細(xì)胞碎片過多。

送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型樣品需求運(yùn)輸條件
組織離體后組織制成單細(xì)胞懸液,加入PBS培養(yǎng)基內(nèi)常溫運(yùn)輸
活細(xì)胞樣本量:1*106個細(xì)胞/TEST,加入PBS培養(yǎng)基內(nèi)常溫運(yùn)輸
血液將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi)常溫運(yùn)輸



流式交付標(biāo)準(zhǔn).jpg


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