核質(zhì)分離檢測不同組分的基因表達(dá)
考馬斯亮藍(lán)有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速，常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定?？捡R斯亮藍(lán)R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對病理組織內(nèi)的蛋白質(zhì)進(jìn)行染色。通過PARISTM Kit Protein and RNA Isolationg System 核質(zhì)分離試劑盒將細(xì)胞的胞核與胞質(zhì)分開，提取這兩部分的RNA，進(jìn)行QP檢測。檢測胞質(zhì)與胞核中目的基因及內(nèi)參基因的表達(dá)在細(xì)胞總表達(dá)的占比。
相關(guān)實驗
實驗承諾函
咨詢記錄
技術(shù)文章
城市
時間
北京市
2026-01-10 09:03:11
陜西省西安市
2026-01-10 04:25:11
遼寧省沈陽市
2026-01-09 21:49:10
河北省石家莊市
2026-01-09 21:11:58
江蘇省南京市
2026-01-09 17:06:29
浙江省湖州市
2026-01-08 15:02:46
浙江省湖州市
2026-01-08 13:18:37
浙江省寧波市余姚市
2026-01-08 11:06:10
浙江省寧波市余姚市
2026-01-08 11:06:05
江蘇省南通市
2026-01-08 09:15:03
基因表達(dá)調(diào)控基本特點
2024-07-19 14:50:50
ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗實驗標(biāo)準(zhǔn)曲線
2024-03-28 16:06:29
ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗結(jié)果分析
2024-03-28 13:44:05
ELISA原理、操作以及注意事項
2024-03-26 17:21:23
QPCR目的和意義
2024-01-15 17:36:24
核質(zhì)分離實驗QPCR數(shù)據(jù)處理
2024-01-15 15:05:16
QPCR數(shù)據(jù)分析以及作圖方法
2024-01-11 14:23:33
QPCR實驗設(shè)計【QPCR實驗外包】
2024-01-10 17:03:29
QPCR原理和主要的三個步驟
2024-01-09 17:37:18
QPCR原理以及數(shù)據(jù)處理
2024-01-05 14:09:57
QPCR檢測實驗詳細(xì)的步驟與報告（三）
2024-01-05 13:07:01
QPCR檢測實驗詳細(xì)的步驟與報告（二）
2024-01-04 17:05:09
QPCR檢測實驗詳細(xì)的步驟與報告(一）
2024-01-04 13:48:46
QPCR檢測的是什么？
2024-01-03 17:34:53
WB檢測實驗報告和詳細(xì)的操作步驟（下）
2023-12-21 14:42:54
WB檢測實驗報告和詳細(xì)的操作步驟（中）
2023-12-21 13:36:16
WB檢測實驗報告和詳細(xì)的操作步驟(上)
2023-12-20 16:36:30
什么是western blot？
2023-12-20 14:22:03
PCR設(shè)計引物的具體步驟【科研干貨】
2023-11-17 13:59:50
引物設(shè)計的依據(jù)【小白適用】
2023-11-16 14:40:06
qPCR引物設(shè)計流程【一文搞懂】
2023-11-16 13:11:45
如何巧妙設(shè)計引物？
2023-11-14 17:29:47
關(guān)于SNP檢測流程和應(yīng)用
2023-03-29 11:24:18
做酶聯(lián)免疫吸附劑測定實驗需要注意什么？
2023-03-27 16:28:08
實時熒光定量 PCR（qPCR）的介紹
2023-03-20 13:08:33
WB實驗檢測介紹——檢測小鼠組織中GSTM2的表達(dá)
2023-03-17 14:12:46
WB實驗原理及流程圖
2023-03-16 16:25:48
亞硫酸氫鈉測序（BSP）實驗步驟【BSP外包】
2022-11-22 15:00:00
什么是亞硫酸氫鈉測序？【甲基化檢測外包】
2022-11-18 15:47:24
DNA染色法檢測支原體操作步驟【支原體檢測外包】
2022-11-04 10:39:27
培養(yǎng)法檢測支原體操作步驟【支原體檢測外包】
2022-11-04 10:22:06
PCR檢測支原體操作步驟【支原體檢測外包】
2022-11-03 17:25:02
支原體檢測方法大全【支原體檢測外包】
2022-11-02 17:03:33
什么是支原體檢測？【支原體檢測外包】
2022-10-27 17:48:46
SNP檢測常見問題答疑下篇
2022-08-09 19:14:35
SNP檢測常見問題答疑上篇
2022-08-09 11:24:24
直接測序法檢測SNP詳解——最常用的方法
2022-08-05 08:58:37
Taqman探針法檢測SNP分型詳解
2022-08-04 15:12:43
SNP檢測方法總結(jié)，有你用過的嗎？
2022-08-02 17:56:41
SNP/單核苷酸多態(tài)性檢測最常用的三種方法
2022-08-02 15:23:47
什么是SNP/單核苷酸多態(tài)性？
2022-08-02 14:16:49
?實時熒光定量PCR實驗技術(shù)答疑
2022-07-28 13:55:45
實時熒光定量PCR常見問題及解決方法
2022-07-27 17:12:19
熒光定量PCR實操注意事項，注意避雷！
2022-07-27 11:49:18
熒光定量PCR結(jié)果分析解讀—熒光定量PCR外包
2022-07-26 11:17:27
熒光定量PCR實驗操作步驟，你做對了嗎？
2022-07-25 17:11:08
什么是實時熒光定量PCR？
2022-07-22 10:18:49
六種甲基化檢測方法【附視頻教程】
2022-05-16 17:09:40
DNA甲基化實驗操作步驟
2022-05-13 11:52:54
?DNA甲基化實驗介紹【科研小白】
2022-05-13 10:27:04
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實操作常見問題處理方法【干貨滿滿】
2022-04-08 16:34:54
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗操作常見問題答疑【附視頻教程】
2022-04-07 17:30:33
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗操作注意事項【附視頻教程】
2022-04-07 16:07:13
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗詳細(xì)操作步驟【附視頻教程】
2022-04-07 13:27:43
科研小白看的ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗簡介與原理【附視頻教程】
2022-04-06 16:01:15
高分文章都怎么研究m6A甲基化
2022-01-10 14:50:24
DNA甲基化提高癌細(xì)胞對EGFR抑制劑敏感性的原因
2021-10-27 00:29:41
高分文章研究RNA甲基化詳細(xì)步驟
2021-10-26 17:19:51
m6A甲基化研究思路設(shè)計方法
2021-10-26 15:44:54
Nature子刊 | DNA甲基化 甲基轉(zhuǎn)移酶異位靶向擬南芥中CG
2021-05-27 17:59:59
實時熒光定量PCR檢測步驟和注意事項【附視頻教程】
2021-04-26 21:06:57
甲基化檢測的幾種方法和實驗流程【附視頻教程】
2021-04-23 11:19:00
細(xì)胞因子檢測方法怎么選？常用檢測方法優(yōu)缺點整理
2021-04-12 15:25:26
這是我見過的WB結(jié)果圖最多的文章！【文獻(xiàn)解讀】
2020-12-17 15:53:24
如何搞定Western Blot中的“奇葩”條帶【干貨文章】
2020-12-11 15:32:22
免疫沉淀及Pulldown這些方法原理你了解多少【新手入門】
2020-12-11 15:01:28
WB實驗技術(shù)介紹【新手入門】
2020-12-11 14:59:38
實驗介紹
實驗原理
通過PARISTM Kit Protein and RNA Isolationg System 核質(zhì)分離試劑盒將細(xì)胞的胞核與胞質(zhì)分開，提取這兩部分的RNA，進(jìn)行QP檢測。檢測胞質(zhì)與胞核中目的基因及內(nèi)參基因的表達(dá)在細(xì)胞總表達(dá)的占比。
實驗方法
Step1: 細(xì)胞收集之后，預(yù)冷的PBS清洗一遍，3000g離心5min后取上清，置于冰上。加入合適體積預(yù)冷的Cell Fractionation Bufeer 重懸細(xì)胞，輕輕打勻。冰上孵育10min。
Step2: 孵育10分鐘后，500g，4℃離心5min，分離胞漿和胞核。上清轉(zhuǎn)移至新的無RNA酶的EP管中，置于冰上，此為胞漿。
Step3: 胞核沉淀加入預(yù)冷的Cell Fractionation Bufeer 重懸，吹打混勻后500g，4℃離心1min，去上清。胞核沉淀中加入預(yù)冷的Cell Disruption Buffer ,冰上裂解至溶液均一。(裂解至溶液透明）
Step4: 胞漿和胞核中分別加入等體積的2X Lysis/Binding Solution，上下顛倒混勻，室溫裂解。
Step5: 加入與裂解液相同體積的無水乙醇，混合均勻。
Step6: 將混合液分別置于濾柱中過濾，10000g，室溫離心1min,丟棄EP管，轉(zhuǎn)移濾柱至試劑盒提供的EP管中進(jìn)行清洗。
Step7: 加入700ulWash SolutionⅠ10000g，室溫離心1min。倒掉液體，濾柱中加入500ulWash Solution2/3，10000g，室溫離心,10000g,室溫離心1min
Step8：倒掉廢液，空管離心一次，10000g，室溫離心1min,更換EP管。
Step9：DEPC水加熱到95-100℃加35ul至濾柱中央，10000g室溫離心30s。丟棄濾柱，分別得到胞漿和胞核的RNA。
案例展示
左：擴(kuò)增曲線； 右：溶解曲線
通過監(jiān)測不同循環(huán)階段的熒光強(qiáng)度，直至曲線平滑達(dá)到細(xì)胞中該基因的表達(dá)高峰。Ct值越低，表達(dá)越高。
通過2-meanCt公式計算基因在胞核與胞質(zhì)的表達(dá)大小，繪制柱狀圖，得到基因在胞核與胞質(zhì)中的表達(dá)占比。
技術(shù)總結(jié)
注意事項：
1. 2X Lysis/Binding Solution可能在4°C下凝固。使用前，將溶液加熱至37°C，偶爾攪拌5-10分鐘，或直至完全溶解。
2. 洗脫水需要在95-100℃水浴鍋中預(yù)熱，更好的洗脫柱膜上的RNA，不過由于洗脫溫度過高可能會導(dǎo)致RNA有些許降解。
交付標(biāo)準(zhǔn)
1. 實驗報告
2. 真實實驗結(jié)果
3. 原始圖片
4. 實驗原始數(shù)據(jù)
5. 剩余物料在周期內(nèi)可返還（超過周期，不予返還）
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
微信關(guān)注公眾號
湘公網(wǎng)安備