免疫熒光/IF
免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時(shí)，只要知道其中的一個(gè)因素，就可以查出另一個(gè)因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
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【技術(shù)原理】
免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時(shí)，只要知道其中的一個(gè)因素，就可以查出另一個(gè)因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
【實(shí)驗(yàn)流程】
案例展示
技術(shù)總結(jié)
【常見問題】
1、無/弱染色
烤片溫度過高，推薦56℃-60℃1-2h；
一抗是否適用固定液和石蠟切片，使用濃度是否過低，孵育是否時(shí)間過短等。
2、非特異性背景染色
是否滅活內(nèi)源性過氧化物酶；
孵育過程中干片；
抗原熱修復(fù)過度。
3、染色過深
一抗?jié)舛冗^高；
染色試劑濃度過高或孵育時(shí)間過長。
【注意事項(xiàng)】
1、熒光染色后一般在1h內(nèi)完成觀察，或于4℃保存4h，時(shí)間過長，熒光可能會(huì)淬滅。
2、實(shí)驗(yàn)對(duì)照設(shè)置越多，結(jié)果越可信。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS 清洗干凈血液等，立即-80℃保存 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過2cmX2cmX0.5cm，固定時(shí)盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內(nèi)容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標(biāo)注好固定液類型和固定時(shí)長 | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對(duì)應(yīng)的特殊固定液進(jìn)行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定 | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定，有效厚度至少要超過 0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊，超過半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現(xiàn)檢測不到蛋白。 | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進(jìn)行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時(shí)間，組織應(yīng)在靠近切片下端 1/3 處。 | 4℃ | 冰袋 | |
| 細(xì)胞爬片 | 使用 12 孔板或 24 孔板專用細(xì)胞爬片，細(xì)胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個(gè)爬片在孔板蓋上應(yīng)有唯一的標(biāo)記，并有電子版的分組信息，以防標(biāo)記在運(yùn)輸途中模糊。 | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質(zhì)化程度不高；對(duì)于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記，并附帶說明書，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計(jì)算抗體用量， 24 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl 一張計(jì)算抗體用量，12 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計(jì)算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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